那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于蛋白質(zhì)的雙向電泳注意事項:
    蛋白質(zhì)的雙向電泳的**向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點不同進行分離；二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經(jīng)過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質(zhì)分子的等電點和分子量信息。
注意事項：
1. 一向聚焦與二向電泳之間需要平衡，時間視蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定，一般為10min，*多不超過15min。
2. 過量的上樣量會引起雙向圖形畸形，特別在一向聚焦時，當樣品濃度超過5mg時，則蛋白質(zhì)凝聚和沉淀，使二向時產(chǎn)生水平和垂直條紋。
3. 含尿素的試劑均應避免過高的溫度處理，一般不要超過30℃，否則尿素分解產(chǎn)生異硫氰酸鹽會引起羧基甲酰化而導致電荷不均一性。
4. **向中過量的去污劑會嚴重影響雙向電泳圖譜，因此聚焦完畢進行平衡前，用雙蒸餾水沖洗膠條，以除去殘留的去污劑。
5. 雙向電泳中雙向凝膠間的界面緊密接觸非常重要，如果接觸不好或者兩者之間留有氣泡，則導致轉(zhuǎn)移時分子擴散。
6. 雙向電泳中的條紋現(xiàn)象是常見的問題。水平條紋可能與一向電泳時間不夠，聚焦不好有關，或者在加樣處產(chǎn)生沉淀和引起重新溶解所致；縱向條紋則表明樣品沒完全溶解，這可以通過調(diào)整樣品量，增加電泳時間，改善樣品的溶解狀態(tài)，同時在加樣前通過高速離心以除掉所有不溶物。
 
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關于蛋白質(zhì)的雙向電泳注意事項。
 
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